Strukturna študija z gvanini bogatega območja v promotorju človeške helikaze FANCJAleksič, Simon (Avtor) Plavec, Janez (Mentor) G-kvadrupleksNMRhelikazaFANCJBRIP1Helikaza FANCJ je človeški protein, ki sodeluje pri procesu popravljanja napak DNA prek homologne rekombinacije. Mutacije helikaze ali spremembe v nivoju njenega izražanja so povezane s Fanconijevo anemijo ter rakom jajčnikov in dojk. Fanconijevo anemijo spremljajo dovzetnost za rakava obolenja in nestabilnost genoma. Helikazo FANCJ kodira gen BRIP1, ki v svoji promotorski regiji v bližini mesta začetka transkripcije vsebuje z gvanini bogato zaporedje, ki lahko tvori G-kvadruplekse. V magistrskem delu smo dokazali, da 32 nukleotidov dolgo zaporedje, ki izvira iz promotorske regije helikaze FANCJ, tvori G-kvadruplekse v raztopini. Z zamenjavami določenih nukleotidov v zaporedju smo dosegli, da oligonukleotid zavzame eno samo strukturo G-kvadrupleksa. Z eno- in dvodimenzionalnimi metodami NMR spektroskopije smo ugotovili, da oligonukleotid z dvema zamenjanima nukleotidoma tvori G-kvadrupleks s hibridno topologijo tipa 2. Z analizo talilnih krivulj smo ugotovili, da je njegova termična stabilnost podobna termični stabilnosti G-kvadrupleksa izvornega oligonukleotida brez zamenjav. Preučili smo pomembnost dolžine propelerske zanke v G-kvadrupleksu hibridne topologije tipa 2 in pokazali, da krajšanje propelerske zanke privede do spremembe strukture iz trikvartene v dvokvartetno. Ugotovili smo, da se z gvanini bogata zaporedja pojavljajo v promotorskih regijah drugih človeških helikaz, ki razvijajo G-kvadruplekse. Predpostavili smo možno biološko funkcijo sistema G-kvadrupleks – helikaza po principu povratne zanke.20202020-09-11 15:15:30Magistrsko delo/naloga119825sl