Identifikacija proteinskih tarč derivata pirazola v bakteriji Escherichia coliMikulič Vernik, Nika (Avtor) Novinec, Marko (Mentor) kemoterapevtikimalomolekulski ligandafinitetna kromatografijamasna spektrometrijamedcelična signalizacijaOdkrivanje spojin s protimikrobnimi lastnostmi je odločilnega pomena za preprečevanje rastoče odpornosti proti antibiotikom. Za iskanje zdravil farmacevtska industrija uporablja pristop iskanja ligandov, ki vežejo (in s tem inhibirajo) tarčni protein. Da bi zaznali tudi interakcije z drugimi celičnimi komponentami in se s tem izognili spojinam s potencialno toksičnim vplivom, v našem laboratoriju uporabljamo pristop iskanja proteinskih tarč malih molekul. V diplomskem delu smo želeli določiti proteinske tarče male molekule 4-(2-aminoetil)-1-(piridin-2-il)-1H-pirzol-5-ol, za katero smo ugotovili, da zavira rast laboratorijskega seva DH5α bakterije Escherichia coli. Spojino smo imobilizirali na agarozni nosilec in pripravljeno kolono uporabili za afinitetno kromatografijo, pri kateri smo iz lizata E. coli izolirali interagirajoče proteine. Eluirane frakcije smo nato analizirali z NaDS-PAGE in poslali na analizo z masno spektrometrijo. Ugotovili smo, da dve intenzivni lisi na gelu predstavljata treonin dehidrogenazo in Fe–S podenoto sukcinat dehidrogenaze. Glede na literaturo je možen mehanizem bakteriostatičnega delovanja tarčne spojine inhibicija treonin dehidrogenaze, ki tako ni sposobna sinteze signalnih molekul. Inhibicija sukcinat dehidrogenaze verjetno ne vpliva na rast bakterije E. coli.20202020-08-31 15:00:23Diplomsko delo/naloga118724sl