7-Substituirani derivati nitroksolina kot potencialni inhibitorji katepsina BČimžar, Jana (Avtor) Štefane, Bogdan (Mentor) katepsin Bnitroksolinmolekulsko sidranjeSuzuki-Miyaura reakcije pripajanjaencimski testiV magistrskem delu smo proučevali nove inhibitorje katepsina B. Delo je sestavljeno iz načrtovanja, sinteze in testiranja prej omenjenih inhibitorjev. Encim katepsin B ima eksopeptidazno in endopeptidazno aktivnost. Prva opravlja pomembne fiziološke funkcije, z drugo pa povezujejo patološka stanja. V zadnjih študijah se je kot inhibitor endopeptidazne aktivnosti katepsina B izkazala uveljavljena zdravilna učinkovina nitroksolin. V povezavi z novejšimi raziskavami so odkrili izboljšan nitroksolinski inhibitor katepsina B. Izboljšan inhibitor ima elektrofilno stransko verigo na mestu 7 nitroksolina. V magistrskem delu smo z molekulskim sidranjem s programskim paketom Schrödinger poiskali nove 7- in/ali 8-substituirane derivate nitroksolina, ki bi lahko inhibitorno delovali na endopeptidazno aktivnost katepsina B. Načrtovani inhibitorji so imeli večinoma v strukturi molekule vključeno rahlo elektrofilno mesto, s katerim bi se v aktivnem mestu encima lahko kovalentno povezali z aminokislinskim ostankom Cys29. Rezultate molekulskega sidranja smo razvrščali na podlagi vrednosti Glide Score in MM-GBSA dG Bind. Rezultate smo primerjali z rezultati referenčnih spojin, torej nitroksolina in izboljšanega 7-substituiranega nitroksolinskega inhibitorja. V nadaljevanju smo sintetizirali in okarakterizirali 13 spojin, ki so v okviru molekulskega sidranja pokazale najobetavnejše rezultate. Večino spojin smo sintetizirali s Suzuki-Miyaura reakcijo pripajanja, pri kateri smo kot reagente uporabili trifluoroborate ali estre borovih kislin. Na koncu smo načrtovane inhibitorne lastnosti sintetiziranih spojin preverili z encimskimi testi. Z merjenjem fluorescence smo opazovali kinetiko encimske pretvorbe ustreznega substrata. Potencialne inhibitorne lastnosti spojin v povezavi z endopeptidazno aktivnostjo človeškega katepsina B smo najprej opazovali s preliminarnimi testi. Zatem smo s titracijskimi krivuljami s programom GraphPad Prism spojinam določili normalizirane IC50 vrednosti. IC50 Vrednost smo določili tudi referenčni spojini nitroksolin. Sedem spojin je imelo bistveno nižje IC50 vrednosti od IC50 vrednosti referenčnega nitroksolina. V magistrskem delu smo izvedli tudi preliminarne teste inhibicije endopeptidazne aktivnosti človeškega katepsina L, da smo preverili selektivnost sintetiziranih potencialnih inhibitorjev.20202020-08-27 12:10:05Magistrsko delo/naloga118578sl