Vpliv lokacije proteina NLRP3 na tvorbo in delovanje inflamasomaAlič, Barbara (Avtor) Benčina, Mojca (Mentor) Hafner Bratkovič, Iva (Komentor) Imunologijainflamasom NLRP3lokalizacijaaktivacija NLRP3Inflamasom NLRP3 je multiproteinski kompleks, ki ima pomembno vlogo pri naravni imunosti. Za njegovo delovanje se mora sestaviti in aktivirati. Kanonična aktivacija poteka v dveh stopnjah, najprej mora priti do aktivacije poti NF-κB z vezavo liganda na receptor TLR, drugo stopnjo pa aktivirajo različni aktivatorji. Rezultat aktivacije inflamasoma je aktivacija kaspaze-1 in posledično izločanje zrelih citokinov IL-1β in IL-18, vodi lahko tudi v celično smrt, imenovano piroptoza. Na katerem mestu v celici pride do njegove aktivacije, še vedno ni pojasnjeno. V magistrski nalogi smo ugotavljali vpliv lokacije inflamasoma NLRP3 na aktivacijo inflamasoma. S kloniranjem smo ustvarili konstrukte NLRP3 v fuziji z rumenim fluorescenčnim proteinom in značko za lokalizacijo na specifične celične organele. Konstrukte smo vnesli v vektor pRetroX-TRE3G, nato pa jih z metodo retrovirusne transdukcije vstavili v mišje makrofage, ki ne vsebujejo lastnega NLRP3 in pripravili stabilne celične linije. Celične linije smo izpostavili LPS ter različnim aktivatorjem inflamasoma NLRP3. S konfokalno mikroskopijo smo pokazali, da nam je uspelo lokalizirati protein na specifične dele v celici. Z encimskoimunskim testom, testom laktat dehidrogenazne aktivnosti pa smo ugotovili, da lokacija NLRP3 vpliva na potek aktivacije inflamasoma.[B. Alič]20202020-07-24 07:15:10Magistrsko delo/naloga117756sl