Optimizacija metod zamrzovanja zarodkov za ohranjanje in upravljanje ogroženih selekcijskih mišjih linij FLI ("debela") in FHI ("vitka").Kobal, Saša (Avtor) Horvat, Simon (Mentor) Klinc, Primož (Komentor) biotehnologijazamrzovanje zarodkovoptimizacija postopkov zamrzovanjapresaditev zarodkovmišja linija LLiniji FLI (angl. Fat, F) in FHI (angl. Lean, L) sta liniji, ki sta nastali z divergentno selekcijo v 60 generacijah na lastnosti povezani z maso telesnega maščevja. Na koncu selekcijskega poskusa je imela linija F visok (~24) odstotek telesnega maščevja, L-linija pa ~4 %. Zaradi ekstremov v deležu telesnega maščevja imata liniji slabše z reprodukcijo povezane lastnosti, kar predstavlja en vidik ogroženosti ohranjanja teh linij samo z vzrejo. Drug vidik ogroženosti je dejstvo, da je reja vezana samo na Oddelek za zootehniko Biotehniške fakultete Univerze v Ljubljani in obstaja možnost, da v primeru bolezni in drugih nesreč ta dva genetska vira izgubimo. Zato je bil glavni namen naloge razviti protokole zamrzovanja za morebitno potrebo po ponovni oživitvi linij. V prvem delu smo želeli optimizirati protokol superovulacije samic z optimizacijo časovnega intervala med aplikacijo hormonov hCG in PMSG. V drugem delu smo preučevali uspešnost pridobivanja dvoceličnih zarodkov in vitro pri linijah L, F ter kontrolnih linijah CD-1 in B6D2F1, ki smo jih po gojenju in vitro zamrzovali z metodo vitrifikacije. Zarodke smo odmrznili in jih gojili v in vitro pogojih do faze blastociste. Pri liniji F se je razvoj ustavil pri štiriceličnem stadiju. Pri liniji L pa se je pri 3 % dvoceličnih zarodkov razvoj nadaljeval do stadija blastociste. Presaditev odmrznjenih dvoceličnih zarodkov linije L je uspela z do 19 % odstavljenih mladičev po kotitvi, za linijo F pa ni uspela. V drugem sklopu magistrske naloge smo želeli vzpostaviti protokol za zamrzovanje semenčic linije F in L, ampak nam kljub modifikacijam ni uspelo razviti učinkovitega protokola. Pri zamrzovanju zarodkov debele linije F in pri postopkih zamrzovanja semenčic linij nismo bili uspešni. Pri selekcijski liniji L pa smo uspeli zamrzniti zarodke in pridobiti žive mladiče po odmrznitvi, in vitro gojenju in presaditi zarodkov.[S. Kobal]20202020-05-01 07:15:09Magistrsko delo/naloga115943sl