<?xml version="1.0"?>
<rdf:RDF xmlns:rdf="http://www.w3.org/1999/02/22-rdf-syntax-ns#" xmlns:dc="http://purl.org/dc/elements/1.1/"><rdf:Description rdf:about="https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=114963"><dc:title>Izražanje heterolognih proteinov v industrijskem gostitelju Streptomyces sp.</dc:title><dc:creator>Ravnik,	Zina	(Avtor)
	</dc:creator><dc:creator>Petković,	Hrvoje	(Mentor)
	</dc:creator><dc:creator>Kranjc,	Luka	(Komentor)
	</dc:creator><dc:subject>streptomicete</dc:subject><dc:subject>Streptomyces rimosus</dc:subject><dc:subject>rekombinantni proteini</dc:subject><dc:subject>heterologno izražanje</dc:subject><dc:subject>caminizin arheje Aeropyrum camini</dc:subject><dc:subject>proteolitična aktivnost</dc:subject><dc:subject>afinitetna kromatografija</dc:subject><dc:description>Bakterija Streptomyces rimosus, producent antibiotika oksitetraciklina (OTC) je industrijsko pomembna bakterija, ki ima GRAS (splošno priznan kot varen) status. Poleg OTC v gojišče učinkovito izloča tudi proteine, zato smo v obsegu magistrske naloge želeli na primeru termostabilne serinske proteaze camizina arheje A. camini ovrednotiti uporabnost bakterije S. rimosus za produkcijo heterolognih proteinov. Proteaza caminizin je glede na aminokislinsko zaporedje zelo podobna pernizinu iz arheje A. pernix, ki je bila nedavno sintetizirana v bakteriji S. rimosus. Konstruirali smo različne konstrukte plazmida pAB04, ki se integrirajo v genom S. rimosus in vsebujejo sekrecijsko sekvenco srt, histidinski repek, konstitutivni promotor ermE* in kodonsko optimizirane zapise za: zrel caminizin (pAB04 ermE* srT Per AC CO HT), procaminizin (pAB04 ermE* srT ProPer AC CO HT) ali preprocaminizin (pAB04 ermE* srT PreProPer AC CO HT). Po določitvi potencialno zanimivih klonov z azokazeinskim testom in cPCR (ang. colony PCR), smo preverili in potrdili sposobnost izločanja tarčnega proteina v gojišče. Uspešno smo detektirali vse tri oblike caminizina, ki smo jih nato identificirali na NaDS-PAGE, cimogramu in potrdili s prenosom po Westernu. Čeprav smo jasno potrdili prisotnost rekombinantnega caminizina, je bila dobljena koncentracija nizka, pojavljali so se tudi drugi nativni proteini. Kljub temu uspeli uspešno identificirati vse tri oblike caminizina. Sledilo je vrednotenje aktivnosti rekombinantnega caminizina. Iz dobljenih rezultatov lahko zaključimo, da je bakterija S. rimosus ΔOTC uporaben gostitelj za izražanje heterolognih proteinov, pri čemer je potrebno z dodatnim razvojem še intenzivno optimizirati gostiteljski sev S. rimosus in razviti boljši postopek izolacije proteina.</dc:description><dc:publisher>[Z. Ravnik]</dc:publisher><dc:date>2020</dc:date><dc:date>2020-04-03 07:15:05</dc:date><dc:type>Magistrsko delo/naloga</dc:type><dc:identifier>114963</dc:identifier><dc:language>sl</dc:language></rdf:Description></rdf:RDF>