Določitev sekretorskega statusa na podlagi prisotnosti alelov sekretorskega gena FUT2 in določitev genotipa krvnoskupinskega sistema Lewis (FUT3) iz vzorca periferne krviPoplašen, Helena (Avtor) Čurin Šerbec, Vladka (Mentor) FUT2FUT3LewissekretorqPCRGena FUT2 (SE) in FUT3 (LE) nosita zapis za encima fukoziltransferazi, ki sta ključna za sintezo antigenov krvnih skupin AB0 in Lewis (Le), gen FUT2 pa hkrati določa sekretorski status posameznika. Oba gena sta zelo polimorfna ter etnično specifična. Namen naloge je bil določiti prisotnost alelov genov FUT2 in FUT3 v vzorcih genomske DNA slovenskih krvodajalcev ter na podlagi tega sklepati na sekretorski status in fenotip krvne skupine Le preiskovanca. Z določitvijo sekretorskega statusa z metodo qPCR smo želeli zagotoviti novo diagnostično storitev, z določitvijo genotipa krvne skupine Le pa izboljšati diagnostiko, predvsem pa omogočiti določitev fenotipa Le, kadar tega ni mogoče izvesti s serološkimi metodami. S podatki iz literature smo za pravilno določitev sekretorskega statusa izbrali najpogostejšo mutacijo 428G>A v genu FUT2 ter optimizirali metodo qPCR. Rezultate smo primerjali z rezultati serološke določitve ter rezultati genotipizacije, ki smo jih pridobili iz Transfuzijskega centra Zürich, Schlieren. Z izbranim pristopom smo pravilno določili prisotnost alelov Se in se in v 100 % pravilno napovedali sekretorski status preiskovancev. Metoda, ki smo jo postavili, je primerna za rutinsko določanje sekretorskega statusa. Za določitev prisotnosti alelov FUT3 smo s podatki iz literature in pravilnim izborom delov gena FUT3 pripravili ustrezne reakcije qPCR za določitev polimorfizmov 59T>G, 202T>C, 314C>T, 508G>A in 1067T>A za alel le, ki so najpogosteje prisotni v kavkaški populaciji. Primerjali smo rezultate posameznih testov z že znanim fenotipom Le v kontrolni skupini. Ugotovili smo, da smo za mutacije 59T>G, 314C>T, 508G>A in 1067T>A uspešno pripravili reakcije qPCR, test za določitev mutacije 202T>C pa ni bil dovolj specifičen in dobljeni rezultati niso bili skladni z znanim fenotipom Le v kontrolni skupini. Določanje fenotipa Le je zaradi različnih kombinacij mutacij zahtevnejše, zato lahko sklenemo, da metoda, ki smo jo zasnovali, ni primerna za rutinsko določanje fenotipa Le in jo je treba nadgraditi.20192019-12-05 16:00:09Magistrsko delo/naloga113128sl