Izražanje senzorjev DNA in določanje celične smrti po genskem elektroprenosu plazmidne DNA na normalnih mišjih celicahUgrin, Maja (Avtor) Čemažar, Maja (Mentor) Bošnjak, Maša (Komentor) genski elektroprenoselektroporacijasenzorji DNApovišano izražanje senzorjevcelična smrtpiroptozaplazmidna DNAGensko zdravljenje je eden od novejših pristopov zdravljenja različnih bolezni. Z vnosom nukleinskih kislin v celico lahko popravimo napako ali pa celici dodamo novo funkcijo. Ena od metod vnosa nukleinskih kislin je genski elektroprenos, pri katerem za vnos genov uporabljamo elektroporacijo. Elektroporacija je fizikalna metoda, ki s pomočjo električnega polja začasno omogoči večjo prepustnost membrane in s tem poveča učinkovitost prenosa snovi. V magistrski nalogi smo želeli ugotoviti, ali z genskim elektroprenosom plazmidne DNA v celico povzročimo povišano izražanje citosolnih senzorjev DNA in ali ti posledično aktivirajo posebno obliko celične smrti, piroptozo. Pri tem smo uporabili dve normalni mišji celični liniji, endotelijske celice 2H11 in keratinocite Kera-308. S qPCR smo določali, kateri senzorji DNA se v celicah povišano izražajo. Pri celicah Kera-308 se je povišano izražal tudi gen za senzor Aim2, ki je pomemben v aktivaciji piroptoze. Ker nas je še posebej zanimala ta oblika celične smrti, smo nadaljnje teste izvajali le na celicah Kera-308. Označili smo izpostavljen fosfatidilserin, določili koncentracijo izplavljenega ATP in aktivnost kaspaze-1. Kljub povišanemu izražanju Aim2 smo na podlagi nadaljnjih testov ugotovili, da do piroptoze v Kera-308 ne pride.20192019-12-04 07:45:35Magistrsko delo/naloga113107sl