Predstavitev proteinskih domen fluorescenčnih proteinov in luciferaze na ogrodju proteinskega origamija iz obvitih vijačnic v obliki tetraedra.Tušar, Anja (Avtor) Jerala, Roman (Mentor) bionanotehnologijaproteinski origamiobvite vijačnicezeleni fluorescenčni proteinRenilla luciferazaTetraedrične kletke, ki jih tvorijo obvite vijačnice, so uspešen primer načrtovanja proteinskih nanomaterialov. Cilj magistrske naloge je bil načrtovati, pripraviti in izolirati tetraedrične proteine, ki imajo na vsa oglišča vezano Renilla luciferazo in zeleni fluorescenčni protein v različnih kombinacijah. Za povečanje fleksibilnosti strukture in s tem produkcije topnega proteina smo luciferazne domene vezali na oglišča preko tri, šest ali devet aminokislinskega povezovalnega zaporedja. Sintetizirane proteine smo očistili z Ni-NTA kromatografijo in gelsko izključitveno kromatografijo. Iz SEC kromatogramov smo razbrali, da je v vzorcih konstruktov s tri-aminokislinskim povezovalnim zaporedjem nižja koncentracija monomernega proteina, kot pri enakih konstruktih s šest aminokislin dolgim povezovalcem. Konstrukti z devet-aminokislinskim povezovalcem so bili izolirani v prenizki koncentraciji za nadaljno karakterizacijo. Uspešno izoliranim proteinskim konstruktom smo določili velikost, delež monomernega proteina in vsebnost sekundarnih struktur z NaDS-PAGE elektroforezo, SEC-MALS in cirkularnim dikroizmom. Konstrukti so imeli najvišjo topnost, najvišji delež monomernega proteina in so bili izolirani v najvišji koncentraciji, če je bila luciferaza na ogrodje vezana preko šest aminokislin dolgega povezovalnega zaporedja. Izolirani proteinski konstrukti so bili pričakovane velikosti in so imeli CD spektre značilne za strukture, ki so večinsko sestavljene iz alfa vijačnic. Dokazali smo uspešno izolacijo tetraedričnega ogrodja z vezanimi domenami luciferaze in zelenega fluorescenčnega proteina.[A. Tušar]20192019-09-22 07:47:27Magistrsko delo/naloga111069sl