Študija prisilne razgradnje terapevtskega monoklonskega protitelesaVovk, Eva (Avtor) Jamnik, Polona (Mentor) Igor Kristian, Štern (Komentor) biotehnologijaprisilna razgradnjaanalitske metodemonoklonsko protitelofarmacijabiofarmacevtikiMed razvojem terapevtskih rekombinantnih monoklonskih protiteles je prisilna razgradnja eno od ključnih orodij za pridobivanje informacij o molekuli, analitski metodi, razvoju procesa in proizvodnje. Zato je ne le priporočljivo, temveč zaželeno, da razvoj analitske metode vključuje prisilno razgrajene vzorce, saj to pomembno vpliva na razumevanje o zmožnostih in omejitvah uporabljenih metod. Namen magistrskega dela je bil izpostaviti biološko učinkovino stresnim pogojem, da bi ugotovili, ali in pri kateri izmed izbranih analitskih metod zaznamo spremembe pri določeni (tarčni) biološki učinkovini in v kolikšni meri. Izbrano biološko učinkovino smo izpostavili različnim dejavnikom: povišani temperaturi in različnim vrednostim pH, oksidantu ter reducentu z različnimi koncentracijami, različni jakosti svetlobe, enkratnemu in večkratnemu zamrzovanju in odmrzovanju, deglikozilaciji z encimom v različnih množinah, povišani množini glukoze ter kovinskima ionoma. Z različnimi kromatografskimi metodami (afinitetna kromatografija, kromatografija z obrnjeno fazo, gelska izključitvena kromatografija, kapilarna gelska elektroforeza pod nereducirajočimi in reducirajočimi pogoji) smo analizirali vzorce in ovrednotili povzročene spremembe. Pokazali smo, da so vse metode, razen afinitetne kromatografije, zmožne zaznavanja sprememb za izbrani protein. Hkrati pa smo ugotovili, da je v študiji vključen protein obstojen tudi pri ekstremnih laboratorijskih pogojih: stabilen je v širokem temperaturnem in pH-območju, pri izpostavitvi umetni svetlobi in pri večkratnem zamrzovanju in odmrzovanju.[E. Vovk]20192019-09-21 07:45:44Magistrsko delo/naloga110983sl