Priprava in karakterizacija načrtovanih proteinskih mrež z različno geometrijoTanšek, Anja (Avtor) Majerle, Andreja (Mentor) Lah, Jurij (Komentor) ovita vijačnicacaldesmonnačrtovani polipeptidnanostrukturaproteinska mrežaBionanotehnologija je obsežno področje, ki dobiva v družbi zaradi številnih gospodarskih, okoljskih, zdravstvenih in socialnih razlogov vedno več pozornosti. Pomemben del bionanotehnologije predstavlja razvoj novih materialov, ki bi jih lahko uporabili za različne namene. S sintezno biologijo, s katero uvajamo v biotehnologijo inženirske pristope, lahko na osnovi naravnih proteinskih gradnikov in takšnih, ki ne obstajajo v naravi, načrtujemo in pripravljamo popolnoma nove bionanomateriale. Če želimo pripraviti bionanostrukture, ki se same sestavijo v načrtovano strukturo, je potrebno najprej natančno načrtovati gradnike, ki bodo sestavljali načrtovano nanostrukturo ali material, nato pa te osnovne gradnike pridobiti in okarakterizirati, na kar smo se osredotočili v tem magistrskem delu. Polipeptidne gradnike 34cald56, različico 34cald56 s fluorescenčnim proteinom in 3APH4 smo pripravili za namene gradnje dveh načrtovanih dvodimenzionalnih proteinskih mrež, ki imata različno geometrijo in se samosestavita iz enega polipeptidnega gradnika. Vse tri proteine smo uspešno pripravili v bakteriji E. coli, izolirali in očistili ter okarakterizirali z biokemijskimi metodami. Potrdili smo, da je sekundarna struktura polipeptidnih gradnikov 34cald56 in 3APH4 v skladu z načrtovano. Iz podatkov meritev cirkularnega dikroizma smo zaključili tudi, da je temperaturna stabilnost proteina 34cald56 višja od temperaturne stabilnosti 3APH4. Z meritvami dinamičnega sipanja svetlobe smo ugotovili, da se zvita polipeptida 34cald56 in 3APH4 v raztopini samosestavita v dimere in večje nanostrukture, ki postanejo netopne in se oborijo iz raztopine, lahko pa se sestavita tudi v topne nanostrukture, ki so v primeru 34cald56 velike približno 120 nm, v primeru 3APH4 pa 60 nm.20192019-09-19 12:00:11Magistrsko delo/naloga110788sl