Napetostne pore pri celicah v hipotonični raztopiniPrša, Aleks (Avtor) Ziherl, Primož (Mentor) Božič, Bojan (Komentor) celice CHOcelična membranaprostorninanapetostna porahipotonična raztopinaV zaključni nalogi smo raziskali spreminjanje prostornine celic in pojav napetostnih por celic v različnih hipotoničnih raztopinah vode in gojišča ter v ekvivalentnih hipotoničnih raztopinah saharoze. Pri poskusih smo uporabili epitelne celice kitajskega hrčka [angl. Chinese hamster ovary (CHO) cell], ki so bile gojene v naprednem minimalnem mediju z dodatkom 5% fetalnega telečjega seruma [angl. fetal bovine serum (FBS)] in antibiotikov v CO2 inkubatorju pri 37°C. Vse poskuse smo opravili s konfokalnim mikroskopom, ki omogoča, da naenkrat presvetlimo in zajamemo le določeno rezino celice. Za poskuse spreminjanja prostornine celic smo celicam označili membrano z označevalnim sredstvom CellMask, za opazovanje napetostnih por celic pa smo celice označili s fluorescentnim označevalcem kalcein. Za določanje prostornine celice smo vsebino celotne celice razdelili na skladovnico vodoravnih rezin po osi z, ki so bile med seboj razmaknjene za 0,5 ?m. Spreminjanje prostornine celic smo opazovali v gojišču, v destilirani vodi in v hipotoničnih raztopinah gojišča s 40%, 60%, 80% in 90% deležem vode ter v ekvivalentnih hipotoničnih 23, 65, 125 in 315 mOsm/l raztopinah saharoze. Celice smo posneli pred zamenjavo hipotonične raztopine in po 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50 in 60 minutah po dodatku hipotonične raztopine. Prostornino celic smo določili tako, da smo izmerili preseke celic na 7 do 14 enakomerno razmaknjenih rezinah. Celice, pri katerih smo opazovali napetostne pore, smo med poskusom opazovali le v eni izbrani goriščni ravnini. Napetostne pore celic smo opazovali v destilirani vodi in v hipotoničnih raztopinah gojišča s 60%, 80%, 85%, 90% in 95% deležem vode ter v hipotoničnih 23, 65 in 125 mOsm/l raztopinah saharoze. Celice v hipotoničnih raztopinah gojišča z višjimi deleži vode in v destilirani vodi smo slikali vsako drugo sekundo 10 minut po zamenjavi raztopine, celice v hipotoničnih raztopinah z nižjimi deleži vode pa smo slikali vsako trideseto sekundo 1 uro po zamenjavi raztopine. Dobljene rezultate meritev prostornine celic smo pojasnili s teoretičnim modelom, ki je bil razvit na Inštitutu za biofiziko Medicinske fakultete Univerze v Ljubljani. Ugotovili smo, da je nenadno razbarvanje oz. nenaden upad intenzitete celic, označenih s kalceinom, posledica nastanka napetostnih por, kar se na posnetkih jasno vidi.20192019-09-19 07:45:53Zaključna naloga110751sl