Konjugacijski prenos plazmida pOX38a v realnem časuStrojin, Bernarda (Avtor) Starčič Erjavec, Marjanca (Mentor) Osterman, Natan (Komentor) Escherichia colikonjugacijafluorescencakonjugativni plazmidikolicin E7Večkratno proti antibiotikom odporne bakterije postajajo čedalje večji problem. Geni za odpornost proti antibiotikom se največkrat nahajajo na konjugativnih plazmidih, ki so sposobni horizontalnega prenosa med dvema celicama, ki sta v neposrednem stiku (=konjugacija). Konjugacija je razlog za hitro širjenje odpornosti v bakterijski populaciji. Alternativa antibiotikom bi lahko postali bakteriocini. Cilj magistrskega dela je bil vizualizirati direkten konjugacijski prenos plazmida pOX38a z zapisom za kolicin E7 z mikroskopom, opremljenim z optično pinceto. Ker nam to ni uspelo, smo v nadaljevanju preverjali možne razloge za ta neuspeh. Določali smo frekvenco konjugacijskega prenosa izbranega plazmida ter preverjali vpliv minimalnega gojišča in vpliv prenašanja bakterij na frekvenco konjugacije. Ugotovili smo, da minimalno gojišče in prenašanje bakterij na frekvenco konjugacije ne vplivata. Nadalje smo želeli ugotoviti način delovanja kolicina E7 na recipientski sev. Zanimalo nas je ali celica po delovanju kolicina lizira in če se spremeni prepustnost membrane in omogoči vstop propidijevega jodida. Ugotovili smo, da kolicin E7 v dovolj visoki koncentraciji deluje bakteriocidno na bakterijski sev. To smo dokazali z merjenjem optične gostote pri valovni dolžini 600 nm in določanjem števila CFU/mL. Do lize oziroma spremembe prepustnosti membrane za vstop propidijevega jodida ne pride. Po 24 urah inkubacije bakterijskega seva s kolicinom lahko nekatere celice pridobijo odpornost proti kolicinu E7, kar kaže zvišanje vrednosti optične gostote in števila CFU/mL.[B. Strojin]20192019-09-19 07:45:46Magistrsko delo/naloga110748sl