Interakcije rekombinantnega pernizina z lipidnimi membranamiGregorič, Klara (Avtor) Poklar Ulrih, Nataša (Mentor) rekombinanten pernizinarheja A. pernixliposomisedimentacijski testazokazeinski testcirkularni dikroizemPernizin je zunajcelična proteaza iz hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix, aktivna v širokem temperaturnem in pH območju. Zunajcelični encimi so lahko pritrjeni na celično membrano ali pa so prosti. V tej nalogi smo skušali odgovoriti na vprašanje ali je pernizin prost ali pritrjen encim. Rekombinanten pernizin smo proizvedli v bakteriji Escherichia coli, iz arhejskih lipidov pa smo pripravili poenostavljene modele celične membrane, liposome. S sedimentacijskim testom smo pokazali, da se pernizin ne veže na liposome pripravljene iz arhejskih lipidov (arheosomi), te ugotovitve pa smo potrdili z azokazeinskim testom. Z uporabo več metod (fluorescenčne emisijske spektrometrije, cirkularnega dikroizma in merjenje fluorescenčne polarizacije z membransko sondo difenilheksatrienom) smo pokazali, da se sekundarna struktura pernizina ob dodatku liposomov ne spremeni bistveno, kar potrjuje odsotnost hidrofobnih povezav med pernizinom in arheosomi. Iz rezultatov pridobljenih z zgoraj navedenimi metodami smo zaključili, da je pernizin prost encim. Ker so prosti encimi značilni za biofilme, smo preverili ali tudi arheja Aeropyrum pernix tvori biofilme. S cimogramom smo dokazali proteolitično aktivnost v sloju, ki je nastal na površini erlenmajerice med gojenjem arheje, kar dokazuje, da lahko arheje Aeropyrum pernix tvorijo biofilme, katerih sestavni del je pernizin.[K. Gregorič]20192019-09-15 07:45:04Magistrsko delo/naloga110472sl