Priprava od majhnih molekul odvisnih dimerizacijskih sistemov na osnovi cepljenih proteinovRihtar, Erik (Avtor) Marinšek Logar, Romana (Mentor) Jerala, Roman (Komentor) sintezna biologijadimerizacijski sistemicepljeni proteinikinaza Lynenoverižni variabilni fragmentCRISPR/dCas9 sistemOd majhnih molekul odvisni dimerizacijski sistemi so pomembno orodje za preučevanje in zunanji nadzor številnih bioloških procesov. Do danes poznamo več takšnih sistemov (naprimer od rapamicina, od abscisinske kisline in od giberelinske kisline odvisne sisteme), vendar je to število še vedno majhno, kar omejuje uporabo. Poleg tega trenutno razpoložljivi od majhnih molekul odvisni dimerizacijski sistemi niso najprimernejši za uporabo v terapevtske namene, saj so nekatere molekule lahko za človeške celice toksične, ali pa sistemi izvirajo iz drugih organizmov in lahko izzovejo imunski odziv pri človeku. Tako smo se v magistrskem delu osredotočili na pripravo novih dimerizacijskih sistemov, ki so zasnovani na osnovi cepljenih človeških proteinov, sposobnih selektivne vezave majhne molekule. S takim pristopom smo pripravili od majhnih molekul odvisne dimerizacijske sisteme na osnovi cepljene kinaze Lyn, ki veže inhibitor dasatinib, ter enoverižnega variabilnega fragmenta protitelesa proti nikotinu. Pripravljene sisteme smo uporabili za od dasatiniba in nikotina odvisno aktivacijo transkripcije v sesalskih celicah v kombinaciji s sistemom CRISPR/dCas9. Verjamemo, da bodo od majhnih molekul odvisni dimerizacijski sistemi, pripravljeni v tem magistrskem delu, pripomogli k razširitvi nabora sintezno-bioloških orodij. Poleg tega je naša strategija univerzalna in uporabna za pripravo številnih novih dimerizacijskih sistemov na osnovi skoraj kateregakoli proteina, ki veže majhne molekule.[E. Rihtar]20192019-09-11 07:47:14Magistrsko delo/naloga110019sl