Priprava humaniziranih sevov kvasovke za funkcijsko analizo patogenih variant genov ING1 in ING3Šalamon, Iris (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) kvasovkehumanizirane kvasovkeCRISPR-Cas9PHO23ING1ING3Kvasovka Saccharomyces cerevisiae je odličen modelni organizem za preučevanje človeških homolognih genov. Dostopnost metod za natančno spreminjanje dednine in ohranjenost genov nam omogočata zamenjavo posameznih genov ali celotnih metabolnih poti. Z zamenjavo lahko predvidimo potencialni vpliv posameznih različic preučevanega gena na kvasovko oziroma na človeka. Takšno orodje bi nam omogočilo hitro in učinkovito testiranje v zelo kratkem času. Cilj naše naloge je bil ugotoviti, ali lahko gena ING1 oziroma ING3 nadomestita kvasni gen PHO23 ter v nadaljevanju testirati vpliv različic genov na fenotip kvasovke. Z metodo CRISPR-Cas9 smo na izbrano mesto uspešno vstavili oba človeška gena. Izbrana metoda je hitra in v kvasovki zelo učinkovita. Metode, s katerimi preverjamo razliko med divjim tipom kvasovke in izbranim mutantom, so enostavne. Testirali smo tri različne fenotipske teste, od katerih je bil ustrezen eden. Dodatek CaCl2 v gojišču inhibira rast delecijskega seva, rast divjega tipa pa je nekoliko zmanjšana. Po uspešni vstavitvi človeških genov v kvasovko smo s fenotipskimi testi ugotovili, da imata humanizirani kvasovki z genom ING1 oziroma z genom ING3 enak fenotip kot delecijski sev pho23?. Posameznih različic gena ING1 oziroma ING3 zato nismo testirali. Na podlagi izolirane RNA sklepamo, da se človeški gen ING1 v kvasovki prepisuje. Tega ne moremo sklepati za človeški gen ING3.20192019-09-11 07:47:11Magistrsko delo/naloga110018sl