Priprava in karakterizacija nanoteles 4T5 in 3T1Zaveršek, Nika (Avtor) Gunčar, Gregor (Mentor) nanoteloenodomensko protitelokoordinacija kovinskih ionovdimerizacijainkluzijska telescaNanotelesa so variabilne domene HCAb (angl. heavy chain antibody), ki jih najdemo v družini Chamelidae. So majhna, stabilna, v obliki samostojne domene, imajo veliko afiniteto do antigena in jih je enostavno izražati v bakterijskih sistemih. Zaradi svojih dobrih lastnosti na veliko področjih prekašajo in izpodrivajo navadna tetramerna protitelesa. V diplomskem delu smo raziskovali dva mutanta nanotelesa M33 z afiniteto do MLKL. Mutanta, nanotelesi 4T5 in 3T1, sta bili pripravljeni tako, da bi lahko tvorili homodimer s pomočjo kobaltovih ionov. Avtoindukcijsko smo ju izrazili v bakterijskem sistemu BL21[DE3]. Izolirali smo ju iz inkluzijskih telesc in ju renaturirali ter očistili s pomočjo histidinske oznake s kolono IMAC na napravi FPLC. Oznako His smo odcepili s proteazo TEV. Nanotelesi 4T5 in 3T1 smo nanesli na kolono za kromatografijo z ločevanjem po velikosti, nato pa smo na kolono za kromatografijo z ločevanjem po velikosti nanesli še nanotelo 4T5 v prisotnosti kobaltovih ionov, da bi ugotovili, če pride do dimerizacije. Tvorba homodimera pod uporabljenimi pogoji ni potekla.20192019-09-10 14:45:08Diplomsko delo/naloga109943sl