Kompeticija med sevi Bacillus subtilis v biofilmihMozetič, Manja (Avtor) Mandić Mulec, Ines (Mentor) Bacillus subtilisbiofilminterakcija med celicamisorodstveno prepoznavanjetekmovanjesodelovanjeprostorska razporeditevrelativni fitnesNaravne izolate Bacillus subtilis lahko uvrščamo v sorodstvene skupine na podlagi testa rojenja, pri katerem se filogenetsko visoko sorodni (»kin«) sevi združujejo, manj sorodni (»non-kin«) sevi pa tvorijo ob srečanju mejno linijo. Ta pojav različnega vedenja do manj sorodnih imenujemo sorodstveno razlikovanje ali sorodstvena diskriminacija. V magistrski nalogi smo raziskovali kako se sorodni (»kin«) in nesorodni (»non-kin«) sevi prostorsko razporedijo znotraj kolonije. Seve smo označili s konstitutivno izraženimi fluorescenčnimi proteini (YFP in mKate) in pri različnih razmerjih in redčitvah dveh sevov opazovali njihovo prostorsko razporeditev v koloniji z lupo z vgrajenimi fluorescenčnimi filtri. Poleg tega smo kvantificirali število celic posameznega seva v koloniji s štetjem kolonij (CFU) na plošči. Ugotovili smo, da sev PS-216 zavira rast seva PS-218 in PS-196. Za vsako izbrano kombinacijo sevov smo izračunali relativni fitnes. Ugotovili smo, da je fitnes skladen s slikami kolonij. Pri nesorodni kombinaciji je en sev prevladal nad drugim, pri sorodnih kombinacijah pa smo zaznali oba seva. Pri nizki gostoti celic, kjer imajo celice dovolj prostora in hranil, so imeli vsi sevi ne glede na izbrano kombinacijo fitnes okoli ena. Z večanjem gostote celic obeh sevov se vrednost fitnesa bolj odmika od vrednosti ena. Pri nesorodni kombinaciji je vrednost fitnesa zmagovalnega seva (PS-216) večja od ena, seva, ki zgubita v kombinaciji (PS-196 in PS-218) pa imata fitnes blizu vrednosti nič. Opazili smo, da imajo sevi, označeni s reporterskim proteinom YFP, boljši fitnes od sevov, označenih z reporterskim proteinom mKate. Ugotavljali smo tudi vpliv gostote celic na prostorsko razporeditev posameznega seva znotraj kolonije. Preučili smo vpliv razmerij med sevi in časa inkubacije na rast kolonije. Spreminjanje razmerja v prid enega seva je povečalo številčnost celic seva znotraj kolonije. Čas inkubacije vpliva samo na velikost kolonije, ne pa na končno razporeditev sevov znotraj kolonije.[M. Mozetič]20192019-09-01 07:45:20Magistrsko delo/naloga109397sl