<?xml version="1.0"?>
<rdf:RDF xmlns:rdf="http://www.w3.org/1999/02/22-rdf-syntax-ns#" xmlns:dc="http://purl.org/dc/elements/1.1/"><rdf:Description rdf:about="https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=109354"><dc:title>Vpliv mutacij na zgradbo in aktivnost fosfolipaze PC-PLC iz bakterije Listeria monocytogenes</dc:title><dc:creator>Kujović,	Amela	(Avtor)
	</dc:creator><dc:creator>Podobnik,	Marjetka	(Mentor)
	</dc:creator><dc:subject>bakterija</dc:subject><dc:subject>Listeria monocytogenes</dc:subject><dc:subject>fosfolipaza C</dc:subject><dc:subject>mutantni proteini</dc:subject><dc:description>Listeria monocytogenes je znotrajcelicni patogen, ki lahko povzroca hude okuzbe pri ljudeh in drugih vretencarjih. Prisotna je v prsti, vodi, vegetaciji in hrani, za izbruhe bolezni pri ljudeh pa naj bi bila predvsem kriva okuzena hrana. Eden od kljucnih virulentnih dejavnikov bakterije je sirokospecificna fosfolipaza C (PC-PLC), ki ob sodelovanju z drugimi virulentni dejavniki, predvsem listeriolizinom O, bakteriji omogoca pobeg iz kislega okolja fagosoma v citosol, kjer se razmnozuje in nato siri v sosednje celice. PC-PLC ima v aktivnem mestu tri cinkove atome, ki so nujni za njeno delovanje. Njen optimum delovanja je v kislem pH (5-6), najvisjo afiniteto pa ima do fosfatidilholinskih fosfolipidov. V magistrski nalogi smo preucili vpliv mutacij v genskem zaporedju za PC-PLC na njeno encimsko aktivnost in vezavo na modelne lipidne membrane v odvisnosti od prisotnosti cinkovih ionov. V bakterijskem ekspresijskem sistemu smo uspesno pridobili sedem mutantih proteinov fosfolipaze PC-PLC, od tega pet s substitucijami ali delecijami v triptofanskem ostanku, ki se nahaja v aktivnem mestu (W1A, W1E, W1F, W1K, ?WS) in dva cisteinska mutantna proteina (C143S, C168K in C143S, C168S). Ocistili smo jih s hitin-afinitetno in gelsko kromatografijo ter jih biokemijsko (SDS-PAGE, test encimske aktivnosti, test vezave na modelne lipidne vezikle) in biofizikalno (cirkularni dihroizem) okarakterizirali. Ugotovili smo, da izbrane mutacije v splosnem ne vplivajo na stabilnost PC-PLC, vplivajo pa na encimsko aktivnost in vezavo proteina na lipidne membrane. Ugotovili smo tudi, da dodatek cinkovih ionov opazno poveca encimsko aktivnost in vezavo PC-PLC na lipidne membrane. Poleg tega smo z optimizacijo kristalizacije PC-PLC vzpostavili temelj za dolocanje tridimenzionalne strukture te fosfolipaze.</dc:description><dc:date>2019</dc:date><dc:date>2019-08-31 07:45:26</dc:date><dc:type>Magistrsko delo/naloga</dc:type><dc:identifier>109354</dc:identifier><dc:language>sl</dc:language></rdf:Description></rdf:RDF>