Testiranje sistema CRISPR/Cas9 za razvoj mišjega modela za avtizemŠtravs, Ana (Avtor) Dovč, Peter (Mentor) Horvat, Simon (Komentor) biotehnologijaCRISPR/Cas9motnje avtističnega spektraastrotaktin 2mišji modelMotnje avtističnega spektra (MAS) so skupina heterogenih nevroloških motenj, ki se razvijejo v zgodnjem otroštvu in pri katerih ima genetsko ozadje močan vpliv. Zaradi visoke genetske variabilnosti in kombinacij faktorjev, ki prispevajo k nastanku bolezni, je mehanizem le-te težko pojasniti. Napredek v humani genetiki in funkcionalni genomiki je izpostavil veliko potencialnih kandidatnih genov, katerih vlogo je potrebno preučiti. V diplomski nalogi smo raziskali potencialni kandidatni gen za avtizem astrotaktin 2 (ASTN2, angl. astrotactin 2) in na podlagi literature opisali njegovo vlogo pri nevralnih migracijah v malih možganih kot prispevajoč faktor za razvoj MAS. Testirali smo potencial CRISPR/Cas9 sistema za razvoj mišjega modela za MAS, s katerim bi lahko v bodoče izvedli obsežno analizo in tako določili povezave med molekularnimi, fiziološkimi, funkcionalnimi in vedenjskimi faktorji. S preliminarnimi poskusi in vitro in in vivo smo poskušali opredeliti izvedljivost uporabe tega pristopa za razvoj mišjega modela. Za tarčo smo si izbrali ekson 2 mišjega gena astrotaktina 2, Astn2. Primernost izbrane sgRNA smo potrdili z in vitro cepitvijo in testom s sistemom pCAG-EGxxFP pri celični liniji HEK293. Rezultati diplome so pokazali, da je izbrana sgRNA učinkovita in robustna za uporabo v nadaljnjih poskusih in vitro in in vivo.[A. Štravs]20192019-06-02 07:45:03Diplomsko delo/naloga107883sl