Optimizacija biosinteznega postopka za pridobitev in izolacijo rekombinatnega pernizina z bakterijo Streptomyces rimosusStare, Nastja (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Kranjc, Luka (Komentor) Streptomyces rimosusserinske proteazepernizinheterologno izražanjeproteolitična aktivnostplazmidafinitetna kromatografijaPernizin je ekstracelularna proteaza arheje Aeropyrum pernix, ki spada v skupino subtilizinu podobnih proteaz. Nativni pernizin ima sposobnost razgradnje prionov, ki se pojavljajo pri Creutzfeldt – Jakobovi bolezni, vendar je njegovo pridobivanje s pomočjo arheje A. pernix zaradi nizkih donosov in zahtevnih pogojev rasti neekonomično. V okviru raziskovalnega dela magistrske naloge, smo kot gostiteljski sistem za heterologno izražanje pernizina uporabili bakterijo Streptomyces rimosus v katerega smo transformirali replikativni E. coli – Streptomyces prenosljivi plazmid pVF, ki je vseboval nukleotidni zapis za rekombinantni pernizin. Tekom eksperimentalnega dela smo transformirali genski zapis za produkcijo pernizina v bakterijo Streptomyces rimosus ∆OTC, uspešnost izražanja rekombinantnega pernizina pa preverili z uporabo afinitetne kromatografije in vizualizacijo na poliakrilamidnem gelu ter dokazali njegovo proteolitično aktivnost z azokazeinskim testom in cimografijo. Rezultati eksperimentov so pokazali, da je bakterija Streptomyces rimosus primerna za produkcijo pernizina s heterologno ekspresijo, nadaljne raziskave pa bodo pokazale, če je rekombinatni pernizin enako odporen na denaturante in če je zmožen razgradnje infektivnih prionov.[N. Stare]20192019-03-29 07:45:02Magistrsko delo/naloga107312sl