Določanje in kvantifikacija mutacije humanega virusa citomegalije (CMV) za odpornost proti zdravilu ganciklovirCvelbar, Tašja (Avtor) Žel, Jana (Mentor) Milavec, Mojca (Komentor) Humani virus citomegalijeodpornostkvantitativni PCRdigitalni PCROkužbe s humanim virusom citomegalije (CMV) so nevarne predvsem za imunsko oslabele gostitelje, kot so prejemniki transplantatov, bolniki s sindromom pridobljene imunske pomanjkljivosti oz. gostitelji z nedozorelim imunskim sistemom. Za zdravljenje in preprečevanje okužb pri ogroženih skupinah se najpogosteje uporablja protivirusno zdravilo ganciklovir. Resne zaplete povzroča pojav odpornosti proti zdravilom, ki so posledica mutacij na genih UL97 in/ali UL54. Natančno zaznavanje in kvantifikacija mutacij je ključna za hitro ukrepanje in prilagajanje zdravljenja. Ker digitalna verižna reakcija s polimerazo (dPCR) omogoča zelo natančno in točno kvantifikacijo redkih polimorfizmov posameznih nukleotidov, njena uporaba na tem področju narašča. V okviru magistrske naloge smo razvili metodo za zaznavanje mutacije L595S (metoda L595S), ki nastane na genu UL97 in povzroča odpornost proti zdravilu ganciklovir. Za razvoj metode smo uporabljali sintetično DNA, ki je bila hibrid dveh zaporedij virusa CMV, dela zaporedja UL97 in dela zaporedja UL54. Metodo L595S smo razvijali in ovrednotili s PCR v realnem času (qPCR) in dPCR, rezultate pa primerjali z delovanjem že ovrednotene metode, ki omogoča natančno in zanesljivo zaznavanje CMV. Dokazali smo, da metoda L595S omogoča zaznavanje majhnih deležev mutacije v ozadju divjega tipa ter da je dPCR bolj občutljiva za zaznavanje mutacije v primerjavi s qPCR.20192019-03-06 09:14:50Magistrsko delo/naloga106576sl