Določanje občutljivosti bakterije Mycoplasma pneumoniae za makrolide z metodo PCR v realnem časuPapež, Anja (Avtor) Keše, Darja (Mentor) mikoplazmeMycoplasma pneumoniaemakrolidni antibiotikiodpornost proti makrolidomPCR v realnem časuanaliza temperature taljenjaMycoplasma pneumoniae povzroča okužbe dihal pri ljudeh vseh starostnih skupin povsod po svetu. Za zdravljenje mikoplazemskih okužb se najpogosteje uporablja makrolidne antibiotike. V zadnjih letih pa je število okužb z odpornimi sevi M. pneumoniae proti makrolidom močno naraslo. Prva poročila o razširjenosti odpornih sevov so se pojavila na Japonskem leta 2000 in se kasneje hitro razširila po celotni Aziji, s časom tudi v Evropo in Ameriko. Rezistenca je povezana s točkovnimi mutacijami v domeni V gena 23S rRNA na mestih 2063, 2064, 2067 in 2617. Najpogostejša mutacija je A2058G (E. coli številčenje), ki ustreza mestu 2063 v genomu bakterije M. pneumoniae in povzroči visoko stopnjo odpornosti. V raziskavi smo želeli pripraviti metodo PCR v realnem času z analizo temperature taljenja za sočasen dokaz okužbe bolnika z bakterijo Mycoplasma pneumoniae in njeno občutljivost za makrolide. Testirali smo 137 vzorcev izolirane DNA bolnikov, pri katerih je bila dokazana okužba z M. pneumoniae z metodo PCR v realnem času in 7 vzorcev DNA M. pneumoniae z že znano mutacijo v genu 23S rRNA, ki smo jo dokazali z metodo pirosekvenciranja. Analiza temperature taljenja je jasno ločila divji sev od mutante. Rezultati testa PCR so bili skladni z rezultati pirosekvenciranja. S testom nismo dokazali nobenega novega seva z odpornostjo proti makrolidom. Občutljivost metode je 10 kopij DNA M. pneumoniae/µL. Dokazali smo 100 % specifičnost testa.[A. Papež]20182018-10-12 07:45:33Magistrsko delo/naloga104818sl