Sinteza sintetičnega mikro-razdelka iz proteinov za izolacijo nukleoproteinskih kompleksov iz bakterije Escherichia coli.Ivanuša, Petra (Avtor) Butala, Matej (Mentor) mikro-razdelekGam»Strep tag«PduKompartmenizacija v bakterijah je pomembna, saj omogoči ločitev specifičnih procesov, ki potekajo v mikro-razdelkih in so ločeni od preostalih procesov v celici. Proteinski mikro-razdelki predstavljajo pomembno orodje v sintetični biologiji. Namen naše raziskave je bil sintetizirati proteinski mikro-rezdelek Pdu iz bakterije Citrobatcter freudii v bakteriji Escherichia coli. V ta namen smo pripravili derivat plazmida pACBSR-DL1, ki je vključeval gene operona pdu pod kontrolo promotorja pBAD, ki se aktivira ob dodatku L-arabinoze. Slednji plazmid, sicer pod kontrolo istega promotorja nosi zapis za še dva proteina, prvi nam omogoči sprostitev izbranega nukleoproteinskega kompleksa iz genoma, da bi ga lahko vključili v mikro-razdelek, drugi protein pa stabilizira DNA v kompleksu. V plazmid pACBSR-DL1 smo v več korakih klonirali nukleotidno zaporedje za proteine PduA-B-J-K-N-U, ki gradijo mikro-razdelek Pdu. Za izolacijo rekombinantnega mikro-razdelka smo uporabili gradientno centrifugiranje in s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata analizirali izolirane proteine.20182018-09-19 07:47:12Magistrsko delo/naloga103524sl