Kvasni peroksin Pex11 in njegova predpostavljena funkcija transporta v membrani unilamelarnih veziklovKošir, Tjaša (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) Skočaj, Matej (Komentor) biologijaSaccharomyces cerevisiaekvasovkeperoksisomiperoksiniPex11Peroksin-11 (Pex11) je membranski protein, ki se nahaja na peroksisomih kvasovke Saccharomyces cerevisiae. Nedavno je bilo predpostavljeno, da naj bi v perkosisomih tvoril pore za prehajanje topljencev manjših od 400 Da. Namen naloge je bil nadgraditi omenjeno raziskavo, pri čemer smo želeli (i) pridobiti rekombinantni Pex11 in preveriti njegovo porotvorno aktivnost na unilamelarnih veziklih napolnjenih s kalceinom ter (ii) preveriti specifičnost pore za prehajanje molekul NADH in koencima A na sistemu planarnih membran. Za pridobivanje Pex11 smo testirali dva različna seva in vektorja ter ovrednotili donos rekombinantnega Pex11 pri različnih pogojih gojenja. Optimiziran postopek gojenja smo prenesli na večjo skalo in uspešno izolirali rekombinatni Pex11. Z namenom doložitve lipidnega vezavnega partnerja smo izvedli sedimentacijski test in točkovni nanos lipidov. Porotvornost smo preverjali s kalceinskim testom na unilamelarnih veziklih, sestavljenih iz celokupnega lipidnega ekstrakta govejih eritrocitov ali fosfatidilholina. Čeprav lipidnega receptorja in specifičnosti pore nismo uspeli določiti, smo z vezikli iz celokupnega lipidnega ekstrakta govejih eritrocitov potrdili, da je Pex11 porotovrni protein.20182018-09-16 07:47:22Magistrsko delo/naloga103373sl