Optimizacija metode štetja mišjih retikulocitov za potrebe določanja in vivo biološke aktivnosti eritropoetina.Kovač, Vito (Avtor) Marinšek Logar, Romana (Mentor) Škrajnar, Špela (Komentor) eritropoetinretikulocitipretočni citometertiazol oranžnoZa zdravljenje anemije, ki je posledica ledvičnih motenj, se uporablja rekombinantni človeški eritropoetin (rHuEPO). Njegovo aktivnost smo testirali s standardiziranim in vivo biološkim testom na mišji liniji B6D2F1 z uporabo fluorescenčne pretočne citometrije, pri čemer smo kvantitativno ovrednotili povišanje deleža retikulocitov v krvi, ki se pojavi kot odziv na injiciran rHuEPO. Cilj magistrske naloge je bil optimizirati analitski test za obarvanje retikulocitov in določiti najboljši čas vzorčenja mišje krvi. Potrdili smo, da je najboljši čas vzorčenja četrti dan po injiciranju substance. Preučili smo tudi različne vplive na pogoje barvanja retikulocitov v krvnih vzorcih. Krvne vzorce smo pobarvali s komercialnim fluorescenčnim barvilom BD Retic-Count in laboratorijsko pripravljenim fluorescenčnim barvilom tiazol oranžno v različnih koncentracijah. Inkubacija vzorcev v barvilu je potekala pod različnimi pogoji (čas, svetloba, vorteksiranje). Z rezultati smo pokazali, da sta barvili primerljivi, vendar obstajajo razlike med obarvanostjo s komercialnim barvilom BD Retic-Count in laboratorijsko pripravljenim barvilom. Optimalna inkubacija vzorca v laboratorijsko pripravljenem barvilu je med 30 minut in 150 minut ne glede na prisotnost ali odsotnost svetlobe. Pred merjenjem na pretočnem citometru je priporočljivo enkratno kratkotrajno vorteksiranje vzorca zaradi zagotovitve homogenosti vzorca. Z boljšim poznavanjem analitskih metod in analitske opreme lahko zagotavljamo boljšo kontrolo kakovosti in s tem omogočamo, da je terapevtsko zdravilo varno in učinkovito za uporabo.[V. Kovač]20182018-09-13 07:47:21Magistrsko delo/naloga103052sl