<?xml version="1.0"?>
<rdf:RDF xmlns:rdf="http://www.w3.org/1999/02/22-rdf-syntax-ns#" xmlns:dc="http://purl.org/dc/elements/1.1/"><rdf:Description rdf:about="https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=102792"><dc:title>Razvoj majhnih monolitnih kromatografskih enot za afinitetno izolacijo bioloških makromolekul in pripravo encimskih reaktorjev</dc:title><dc:creator>Žigon,	Rok	(Avtor)
	</dc:creator><dc:creator>Podobnik,	Marjetka	(Mentor)
	</dc:creator><dc:creator>Černigoj,	Urh	(Komentor)
	</dc:creator><dc:subject>monolit</dc:subject><dc:subject>CIM</dc:subject><dc:subject>afinitetna kromatografija</dc:subject><dc:subject>mini disk</dc:subject><dc:subject>proteaza TEV</dc:subject><dc:subject>Listeriolizin O</dc:subject><dc:subject>DARPin</dc:subject><dc:subject>imobilizirani encimski reaktorji</dc:subject><dc:description>V magistrskem delu je predstavljen razvoj monolitnih kromatografskih kolon majhnih volumnov (v nadaljevanju mini diski), optimiranih za afinitetno kromatografijo. Razvito je bilo 3-delno ohišje iz polioksimetilena kopolimera (POM-C), ki omogoča uporabo mini diskov treh različnih velikostnih razredov (50 µL, 100 µL in 200µL) tako na HPLC/FPLC sistemih kot tudi brez – z ročnim prečrpavanjem preko brizg. Optimizacija ohišja je vključevala manjšanje mrtvega volumna in odpravo nespecifičnih adsorbcij bioloških molekul na kromatografske frite. Dokaz uspešne priprave afinitetnih mini diskov smo dosegli z imobilizacijo rekombinantnega proteina A na stacionarno fazo. Z uvedbo predhodne kvalitativne karakterizacije mini diskov v fazi hidroksi modifikacije monolita, smo s testom pulzne motnje (testiranje puščanja) in uvedbo benzimidazolne dinamične vezavne kapacitete, kot analoga IgG (testiranje homogenosti), dosegli optimizacijo imobilizacije in celotnega procesa monolitne afinitetne kromatografije. Pripravo encimskega reaktorja smo dosegli z izolacijo encima proteaza TEV iz bakterije Escherichia coli, katerega smo kovalentno vezali na različno aktivirane (karbonil diimidazol (CDI) in aldehidne skupine) mini diske. Aktivnost vezane proteaze TEV smo preverjali s cepitvijo afinitetnega podaljška (His-repek) rekombinantnih proteinov Listeriolizin O (LLO) in DARPina. Cepitve afinitetnih podaljškov pri rekombinantnih proteinih z uporabo encimskih reaktorjev nismo dosegli v nobenem primeru, kljub dokazani encimski aktivnosti proteaze TEV za cepitev DARPina v raztopini. Za dosego uspešnosti cepitve, bi bila potrebna nadalnja raziskovanja v smeri optimizacije imobilizacije (vezava encima z uporabo aldehidne ročice, ali disulfidna kovalenta vezava preko tiolnih skupin cisteinskih ostankov) ter testiranje aktivnosti encima v različnih imobilizacijskih pufrskih raztopinah.</dc:description><dc:date>2018</dc:date><dc:date>2018-09-08 07:46:14</dc:date><dc:type>Magistrsko delo/naloga</dc:type><dc:identifier>102792</dc:identifier><dc:language>sl</dc:language></rdf:Description></rdf:RDF>