Optimizacija elektroporacije za aktivacijo genov vključenih v diferenciacijo regulatornih celic TMartinšek, Klemen (Avtor) Oven, Irena (Mentor) biotehnologijaeletroporacijaregulatorne celice Tavtoimune bolezniCRISPR-CasFOXP3CTLA4EOSCD4CD25Regulatorne celice T so specializirana podpopulacija limfocitov T, ki s svojim delovanjem vzdržujejo imunsko toleranco. Odsotnost regulatornih celic T vodi v razvoj avtoimunskih obolenj in v nenadzorovano proliferacijo limfocitov T in B, kar vodi v nastanek kroničnih vnetij. Dokazano je, da z vnosom regulatornih celic T stanje bolezni lahko izboljšamo, zato so v razvoju metode za diferenciacijo konvencionalnih limfocitov T v regulatorne limfocite T. V diplomskem delu smo v Jurkat celice z elektroporacijo vnesli dCas9-VPR in različne kombinacij plazmidov za sgRNA ter s tem poskusili aktivirati za diferenciacijo pomembne gene. Merili smo spremembo ekspresije genov FOXP3, CTLA4, EOS, CD25 in CD4. Najvišje povišanje izražanja FOXP3 smo dosegli s kombinacijo koaktivacije genov FOXP3 in CTLA4. Slednja kombinacija je bila najuspešnejša tudi v primeru zvišanja ekspresije CD25. Ekspresija CD4 je ostala v večini primerov nespremenjena. Kostimulacija genov FOXP3, CTLA4 in EOS je v nasprotju s pričakovanji pokazala na negativen učinek na ekspresijo opazovanih genov. V diplomskem delu smo dokazali, da kombinacija vnesenih plazmidov vpliva na različno ekspresijo genov pomembnih za diferenciacijo regulatornih celic T.[K. Martinšek]20182018-09-05 07:45:41Diplomsko delo/naloga102608sl