Vpliv priprave in fiksacije citoloških vzorcev na imunocitokemično dokazovanje diagnostičnih in napovednih dejavnikov malignih tumorjevSrebotnik Kirbiš, Irena (Avtor) Strojan Fležar, Margareta (Mentor) citologijaimunocitokemijaimunohistokemijacitološki vzorcipriprava preparatovfiksacijaimunoreaktivnostestrogenski receptorjiOzadje: Za imunocitokemično (ICK) dokazovanje diagnostičnih in napovednih dejavnikov na citoloških vzorcih smo razvili enostaven in učinkovit postopek priprave preparatov, pri katerem citološke vzorce suspendiramo v celičnem mediju in s citocentrifugo pripravimo potrebno število dodatnih preparatov, ki jih fiksiramo in do uporabe shranimo v metanolu. Namen raziskave: Ugotoviti, ali postopek priprave citoloških vzorcev za ICK, ki smo ga razvili, dobro ohrani imunoreaktivnost antigenov in zagotavlja zanesljivo ICK-dokazovanje diagnostičnih in napovednih dejavnikov. Materiali in metode: Vse vzorce za ICK smo suspendirali v celičnem mediju in pripravili citospine. Na humani celični liniji raka dojke (MFC-7) smo najprej potrdili, da fiksacija in shranjevanje citospinov v metanolu, dobro ohrani imunoreaktivnost estrogenskih receptorjev (ER) in določili pogoje ICK-reakcije, nato smo to potrdili še na vzorcih aspiracijskih biopsij (ABTI) raka dojke. Na različnih citoloških vzorcih smo ugotavljali, ali fiksacija tako pripravljenih citospinov v metanolu dobro ohrani tudi imunoreaktivnost označevalcev pripadnosti (CD3, CD10, CD20, CD30, CD31, CD45, CD56, CD68, CD117, CD138), citokeratinov (MNF116, AE1/AE1, CK 7, CK 19, CK 20), drugih intermediarnih filamentov (dezmina, gladkomišičnega aktina, vimentina) in še 20 drugih diagnostično pomembnih označevalcev (α1-fetoproteina, hepatocitnega antigena, HMB45, kalcitonina, kalretinina, kromogranina, Ki67 antigena, MelanA, MOC31, p53 in p16, P504S, PSA, progesteronskih receptorjev, RCC, S100, sinaptofizina, tiroglobulina, TTF1, WT-1). Rezultate ICK-reakcij na citospinih, pripravljenih iz diagnostičnih citoloških vzorcev in citoloških vzorcev, pripravljenih iz svežih histoloških vzorcev, smo primerjali z rezultati imunohistokemičnih (IHK) reakcij na odgovarjajočih histoloških vzorcih, fiksiranih v formalinu in vklopljenih v parafin (FFVP). Za ugotavljanje razlik v deležu ER pozitivnih celic glede na način fiksacije smo uporabili Duncanov test za zvezne spremenljivke, za analizo skladnosti ICK- in IHK-reakcij pa Cohenov kapa koeficient (κ). Rezultati: Na citospinih, fiksiranih v metanolu, smo ugotovili najvišji delež ER pozitivnih celic MCF-7 z najnižjo variabilnostjo (72 ± 5 %) in popolno skladnost rezultatov določanja ER na citoloških in odgovarjajočih FFVP-vzorcih (52/52, 100 %, κ = 1,00). Fiksacija v metanolu je dobro ohranila tudi imunoreaktivnost vseh drugih 38 testiranih antigenov. Skladnost ICK-rezultatov na citospinih pripravljenih iz diagnostičnih citoloških vzorcev in svežih histoloških vzorcev, z IHK-rezultati na FFVP-vzorcih, je bila v obeh skupinah vzorcev zelo visoka (141/146, 97 %, κ = 0,93 in 81/86, 94 %, κ = 0,88). Ugotovitve: Postopek priprave citoloških vzorcev za ICK, ki smo ga uporabili v naši raziskavi, je enostaven, učinkovit in zagotavlja zanesljive ICK-rezultate.20182018-08-23 07:15:06Doktorsko delo/naloga102359sl