Pridobivanje ter karakterizacija rekombinantnega egerolizina in proteina z domeno MACPF iz entomopatogene glive Beauveria bassiana.Lemež, Špela (Avtor) Kraševec, Nada (Mentor) biotehnologijaentomopatogene gliveegerolizinidomena MACPFperforiniPerforini so proteini, ki s tvorjenjem por v membrane predstavljajo velik biotehnološki potencial na biofarmacevtskih, analitičnih in agronomskih področjih. Znanih je več različnih perforinov in proteinskih parov, ki skupaj tvorijo pore, njihov širok spekter možne uporabe pa kliče po novih raziskavah. Pomembno je natančno poznavanje njihovih molekularnih mehanizmov, ki vplivajo na njihovo biološko funkcijo in možne aplikacije. V tej diplomski nalogi smo se odločili preveriti potencial entomopatogene glive Beauveria bassiana, njenega egerolizina in proteina z domeno MACPF, z namenom ugotavljanja njune interakcije pri formiranju por. Izbrali smo dva gena, za katera je obstajala verjetnost, da glivi omogočata entomopatogeno delovanje s tvorbo por v žuželčjo kutikulo. Tekom raziskave smo uspešno klonirali in izrazili oba proteina v rekombinantni bakteriji, egerolizin smo uspešno izolirali v čisti obliki. Na njem smo uspešno izvedli več analitskih metod, ki so pokazale, da smo protein najverjetneje pridobili v pravilnem zvitju. Sedimentacijski test in površinska plazmonska resonanca sta pokazala močno vezavo egerolizina na kombinacijo lipidov ceramid fosfoetanolamin in sfingomielin, kar nakazuje na predvideno biološko funkcijo. Za natančnejšo določitev bioloških funkcij obeh proteinov in dokončno preverbo njunih potencialov kot pesticidnih sredstev in morebitne druge aplikacije pa so zagotovo potrebne nadaljnje analize.[Š. Lemež]20182018-07-08 07:46:19Diplomsko delo/naloga101845sl