Uporaba lektinov za prepoznavanje glikanskih struktur terapevtskih proteinovCvijić, Tamara (Avtor) Marinšek Logar, Romana (Mentor) Marušič, Jaka (Komentor) celična linija CHOrekombinantna terapevtska protitelesaterapevtski proteinilektiniglikozilacijaBLIBiološka zdravila so proizvedena s tehnikami molekulske in celične biologije in so proteinske narave. Med rekombinantnimi proteini se v zadnjem času vse bolj uveljavljajo monoklonska protitelesa (mAb) pridobljena s tehnologijo rekombinantne DNA. Protitelesa (Ab) so glikoproteini, ki so bistvenega pomena pri protitelesnem imunskem odzivu. Med njihovo sintezo prihaja do post-translacijskih sprememb in ena izmed glavnih je glikozilacija. Pri slednji celice ovarijev kitajskega hrčka (CHO), ki so trenutno prevladujoč ekspresijski sistem, na protein pripenjajo različne glikanske strukture. Le-te lahko znatno vplivajo tako na fizikalno-kemijske lastnosti kot tudi na efektorske funkcije Ab: od protiteles posredovana celična citotoksičnost (aktivnost ADCC), nizka imunogenost, od komplementa odvisna citotoksičnost (aktivnost CDC) ter primeren razpolovni čas Ab v telesu pacienta. Pri razvoju in proizvodnji terapevtskih proteinov je zato merjenje in uravnavanje glikanskih struktur ključnega pomena. Namen raziskovalne naloge je bil razviti metodo za kvantifikacijo glikanskih struktur s proteini, ki specifično prepoznavajo in se reverzibilno vežejo na glikanske strukture proteinov. Poznamo jih pod imenom lektini. Pri raziskovalnem delu smo uporabljali tehniko BLI (ang. Bio-Layer Interferometry), s katero je mogoče spremljati vezavo v realnem času. Razvili smo uporabno orodje za kvantifikacijo glikanov v prečiščenih denaturiranih vzorcih, ki se je izkazalo kot odlična alternativa relativno dolgotrajnim in dragim konvencionalnim metodam.[T. Cvijić]20182018-06-30 07:45:51Magistrsko delo/naloga101722sl