Kvantifikacija odziva biosenzorja Bacillus subtilis na signalni peptid ComXPandur, Žiga (Avtor) Mandić Mulec, Ines (Mentor) Dogša, Iztok (Komentor) Bacillus subtiliskomunikacija med celicamizaznavanje kvorumasignalni peptidComXmikrobiološke metodelaserska konfokalna mikroskopijaV magistrskem delu smo spremljali odziv bakterije Bacillus subtilis PS-216 na signalni peptid ComX, ki sproži odziv na kvorum (zadostno število) celic. Optimizirali smo protokol za pripravo rekombinatnega peptida ComX v bakteriji Escherichia coli ED367 in ga uspeli izboljšati tako, da smo kulturo najprej namnožili do visoke celične gostote in nato v naslednji stopnji inducirali sintezo ComX z IPTG. Tako pripravljen ComX shranjen v pufru SS in BSA je bil relativno stabilen pri temperaturi 4 °C in razpolovna doba ComX je bila 100 dni. Odziv surfaktinskega promotorja (PsrfAA) na ComX smo spremljali s pomočjo reporterskega gena yfp ali gena, ki kodira -galaktozidazo. Primerjali smo odziv na ComX dveh biosenzorjev (BM1456 in BM1455), ki ne proizvajata signala in ki smo jima dodali ComX: biosenzor 1 je imel gen comQ prekinjen z antibiotičnim označevalcem; biosenzor 2 je imel gen comQ prekinjen s tehnologijo brez označevalca. Naši rezultati so potrdili, da je biosenzor 1 bolj občutljiv na ComX (k= 2,7 ± 0,2) kot biosenzor 2 (k=3,5 ± 0,2). Izboljšali smo tudi metodo za kvantitativno analizo odziva biosenzorja na ComX s konfokalno mikroskopijo na nivoju posamezne celice. Rezultati so pokazali, da se B. subtilis odziva šele po treh urah izpostavljenosti ComX, ko je populacija v eksponentni fazi rasti, odziv se poveča na prehodu v stacionarno fazo (po 4 urah) do maksimalne jakosti in je primerljiv odzivu v stacionari fazi rasti (po 6h urah inkubacije).[Ž. Pandur]20182018-06-10 07:45:06Magistrsko delo/naloga101491sl