Uravnavanje elementarnih dogodkov eksocitoze in endocitoze v astrocitih v kulturiLasič, Eva (Avtor) Stenovec, Matjaž (Mentor) astrocitieksocitozaendocitozafuzijska poraelektrofiziologijamikroskopija SIMAstrociti so celice nevroglije v živčnem sistemu, ki sodelujejo v medcelični komunikaciji z ekso-/endocitozo mešičkov. Z namenom, da bi bolje razumeli interakcije posameznih mešičkov s plazmalemo, smo uporabili elektrofiziološko metodo vpete napetosti membrane celice v konfiguraciji pripete celice in super-ločljivostno mikroskopijo s strukturirano osvetlitvijo ter raziskali vpliv različnih farmakoloških učinkovin na ekso-/endocitozo in fuzijsko poro mešičkov v podganjih astrocitih v kulturi. Ketamin, lipofilni anestetik z antidepresivnim delovanjem, je inhibiral izzvano eksocitotsko izločanje BDNF ter popolno in prehodno zlivanje mešičkov s plazmalemo. Dodatno je ketamin inhibiral endocitozo, saj je izzval utripanje fuzijske pore mešičkov pripetih na plazmalemo, ki se niso odcepili v citosol. Podobno kot ketamin, sta inhibitorja aktivnosti dinamina Dynole-34-2 in Dyngo-4a povzročila utripanje fuzijske pore z zmanjšano prevodnostjo. S pomočjo fluorescentnih dekstranov in lipofilnega barvila DiD smo pokazali, da inhibicija dinamina prepreči internalizacijo mešičkov v citosol; le-ti verjetno ostanejo povezani s plazmalemo z utripajočo fuzijsko poro. Aktivator dinamina Ryngo-1-23 je zmanjšal utripajočo aktivnost fuzijske pore, favoriziral zaprto stanje pore in povečal endocitotsko internalizacijo mešičkov v citosol. Rezultati kažejo, da je dinamin vpleten tudi v zlivanje VAMP2- in Syt4-pozitivnih eksocitotskih mešičkov. Povečana koncentracija sekundarnega prenašalca cAMP pa je povečala prevodnost fuzijske pore, favorizirala odprto stanje pore ter spodbudila popolno zlivanje večjih mešičkov s plazmalemo. Naši rezultati kažejo, da ketamin zmanjša, medtem ko cAMP poveča verjetnost za izločanje snovi iz mešičkov. Novo odkriti farmakološki vplivi na procese ekso-/endocitoze v astrocitih prispevajo k razumevanju medcelične komunikacije na ravni posameznega mešička v nevrofiziologiji.[E. Lasič]20182018-05-09 09:48:59Doktorsko delo/naloga101175sl