Določanje površinskih označevalcev na primarnih celicah iz perinatalnih tkiv z metodo pretočne citometrije

Kočet, Monika (avtor), Zupan, Janja (mentor), Trojner Bregar, Andreja (komentor)

Mezenhimske matične/stromalne celice (MSC) so heterogena populacija multipotentnih celic, za katere so značilne sposobnost samoobnavljanja in diferenciacije v različne celične linije. Za njihovo opredelitev se uporabljajo kriteriji Mednarodnega združenja za celično in gensko terapijo (ISCT), ki vključujejo adherentnost na plastiko, sposobnost diferenciacije v osteogeno, hondrogeno in adipogeno linijo ter značilen imunofenotip (≥ 95 % pozitivnih celic za CD73, CD90 in CD105 ter ≤ 2 % pozitivnih celic za hematopoetske označevalce). MSC lahko izoliramo iz različnih virov, med katerimi imajo danes vse večji pomen perinatalna tkiva, ker predstavljajo etično sprejemljiv in po porodu lahko dostopen vir celic. V magistrski nalogi smo analizirali površinske označevalce primarnih celic, izoliranih iz amnijske membrane in posteljice oziroma decidue. Pri tem smo določali izražanje pozitivnih označevalcev, značilnih za MSC, CD73, CD90 in CD105, ter izražanje hematopoetskih označevalcev CD45, CD235a in CD146. Poleg tega smo preverili tudi, ali med celicami, izoliranimi iz amnijske membrane in posteljice, obstajajo razlike v izražanju preiskovanih označevalcev. Naši rezultati so pokazali, da analizirane primarne celice iz perinatalnih tkiv ne izpolnjujejo kriterijev ISCT za opredelitev MSC. Nobeden izmed analiziranih vzorcev ni hkrati dosegel deleža ≥ 95 % za vse tri pozitivne označevalce CD73, CD90 in CD105 ter deleža ≤ 2 % za hematopoetske označevalce CD45, CD235a in CD146. Pri primerjavi celic, izoliranih iz amnijske membrane in posteljice, nismo ugotovili statistično značilnih razlik v izražanju analiziranih označevalcev. Na rezultate so lahko vplivali biološki in tehnični dejavniki, kot je heterogenost MSC, način izolacije, pogoji gojenja celic ter šibka vezava uporabljenih protiteles za analizo s pretočno citometrijo. Na podlagi pridobljenih rezultatov smo ugotovili, da bi bilo za natančnejšo imunofenotipsko karakterizacijo primarnih celic iz perinatalnih tkiv smiselno razširiti panel površinskih označevalcev, optimizirati protokol imunofenotipizacije ter analizo izvesti na večjem številu vzorcev.

• Jezik: Slovenski jezik
• Ključne besede: mezenhimske matične/stromalne celice (MSC), perinatalna tkiva, pretočna citometrija, imunofenotipizacija, površinski označevalci
• Vrsta gradiva: Magistrsko delo/naloga
• Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
• Organizacija: FFA - Fakulteta za farmacijo
• Založnik: [M. Kočet]
• Leto izida: 2026
• PID: 20.500.12556/RUL-184422
• UDK: 602.9(043.2)
• COBISS.SI-ID: 283866371
• Datum objave v RUL: 07.07.2026

Sekundarni jezik

• Jezik: Angleški jezik
• Naslov: Detection of surface markers in primary cells from perinatal tissues using flow cytometry

Izvleček

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) are a heterogeneous population of multipotent cells characterized by their ability for self-renewal and differentiation into different cell lineages. Their identification is based on the criteria of the International Society for Cell & Gene Therapy (ISCT), which include plastic adherence, differentiation into osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages, and a characteristic immunophenotype (≥ 95 % positive cells for CD73, CD90 and CD105, and ≤ 2 % positive cells for hematopoietic markers). MSCs can be isolated from different sources, among which perinatal tissues are becoming increasingly important, because they represent an ethically acceptable and accessible source of cells after birth. In this master’s thesis, we analyzed surface markers of primary cells isolated from the amniotic membrane and placenta, specifically decidua. We analyzed the expression of positive MSCs markers CD73, CD90 and CD105, and the expression of hematopoietic markers CD45, CD235a and CD146. We also analyzed whether there is a difference in the expression of these markers between cells isolated from the amniotic membrane and placenta. Our results showed that analyzed primary cells do not fulfill the ISCT criteria for MSCs. None of the analyzed samples simultaneously reached ≥ 95 % expression of all three positive markers CD73, CD90 and CD105, together with ≤ 2 % expression of the hematopoietic markers CD45, CD235a and CD146. When comparing cells isolated from the amniotic membrane and placenta, no statistically significant differences were found in the expression of the analyzed markers. Different biological and technical factors could have affected our results, such as the heterogeneity of MSCs, the method of isolation, cell culture conditions and possible weak binding of the antibodies used for flow cytometry analysis. We concluded that for a more accurate immunophenotypic characterization of primary cells from perinatal tissues, it would be useful to expand the panel of surface markers, optimize the immunophenotyping protocol and perform the analysis on a larger number of samples.

• Ključne besede: mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), perinatal tissues, flow cytometry, immunophenotyping, surface markers