Optimizacija izolacije cirkulirajočih zunajceličnih veziklov in miRNA v plazmi bolnikov z depresijo

Malečkar, Nika (avtor), Videtič Paska, Alja (mentor)

Zunajcelični vezikli so majhni membranski vezikli, ki jih izločajo celice in igrajo pomembno vlogo v medcelični komunikaciji. Delimo jih na majhne vezikle, mikrovezikle in apoptotske vezikle, odvisno od njihovega izvora in velikosti. Vsebujejo različne biomolekule, vključno z lipidi, proteini, RNA in DNA, kar jim omogoča pomembno vlogo pri prenosu signalov med celicami. Zunajcelični vezikli vplivajo na delovanje možganov in imunskega sistema ter sodelujejo pri patofiziologiji bolezni. So potencialni biooznačevalci za različna bolezenska stanja, vključno z rakom, nevrodegenerativnimi boleznimi in psihiatričnimi motnjami, med katere sodi tudi depresija. Z namenom standardizacije izolacije in karakterizacije veziklov smo s sledenjem minimalnih eksperimentalnih zahtev za opredelitev zunajceličnih veziklov in njihovih funkcij, poskušali najti najboljšo metodo izolacije za uporabo v kliničnem okolju. Glede na pridobljene rezultate sta se izolacija z ultracentrifugiranjem s saharozno blazinico in izolacija s komercialnim kompletom za izolacijo zunajceličnih veziklov z obarjanjem (Total Exosome Isolation Kit (from plasma) (Invitrogen$^{TM}$, Thermo Fisher Scientific, ZDA)) izkazali za primerljivi. Z obema metodama smo uspešno izolirali vezikle in izvedli vse analize za karakterizacijo in potrditev prisotnosti zunajceličnih veziklov ter določitev izražanja miRNA. Za uporabo v kliničnem okolju pa je najbolj primerna uporaba komercialnega kompleta za obarjanje, saj je hitra in enostavna metoda.

• Jezik: Slovenski jezik
• Ključne besede: izolacija, zunajcelični vezikli, depresija, ultracentrifugiranje, miRNA, qRT-PC
• Vrsta gradiva: Magistrsko delo/naloga
• Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
• Organizacija: FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
• Leto izida: 2024
• PID: 20.500.12556/RUL-164006
• COBISS.SI-ID: 218004995
• Datum objave v RUL: 15.10.2024

MALEČKAR, Nika, 2024, Optimizacija izolacije cirkulirajočih zunajceličnih veziklov in miRNA v plazmi bolnikov z depresijo [na spletu]. Magistrsko delo. [Dostopano 5 maj 2025]. Pridobljeno s: https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?lang=slv&id=164006

Sekundarni jezik

• Jezik: Angleški jezik
• Naslov: Optmisation of circulating extracellular vesicles and miRNA isolation from plasma of depressed patients

Izvleček

Extracellular vesicles are small membrane-bound vesicles secreted by cells that play an important role in intercellular communication. They are categorized into small vesicles, microvesicles, and apoptotic vesicles, depending on their origin and size. They contain various biomolecules, including lipids, proteins, RNA, and DNA, which enable them to play a significant role in signal transmission between cells. They influence brain and immune system function and are involved in the pathophysiology of disease. They are potential biomarkers for various disease conditions, including cancer, neurodegenerative diseases, and psychsiatric disorders, including depression. To standardize the isolation and characterization of vesicles, we followed minimal information for studies of extracellular vesicles to identify the best isolation method for clinical use. Based on the obtained results, both ultracentrifugation through a sucrose cushion and isolation of vesicles with a reagent kit based on percipitation (Total Exosome Isolation Kit (from plasma) (Invitrogen$^{TM}$, Thermo Fisher Scientific, ZDA)) proved to be comparable. Both methods successfully facilitated all analyses for the characterization and confirmation of the presence of extracellular vesicles, as well as the determination of miRNA expression. For clinical use, the reagent kit for precipitation is most suitable due to its speed and simplicity.

• Ključne besede: isolation, extracellural vesicles, depression, ultracentrifugation, miRNA, qRT-PCR