Optimizacija izbranih dejavnikov predanalizne in analizne faze pri mikroskopskem pregledu induciranega izmečka

Žibert, Urša (avtor), Marc, Janja (mentor), Kern, Izidor (komentor)

Induciranje izmečka je metoda, s katero spodbudimo izločanje sluzi iz dihalnih poti. Vzorec, ki ga običajno ob kašlju izločimo (izpljunemo) iz ust, imenujemo inducirani izmeček in izhaja iz dihalnih poti. Inducirani izmeček je najpogosteje pridobljen z vdihavanjem aerosolov hipertonične solne raztopine, ki jih proizvaja ultrazvočni razpršilec. Kapljice solne raztopine dražijo sluznico, sprožijo kašelj in povzročijo izkašljevanje izmečka. Laboratorijske preiskave induciranega izmečka so uporabne v diagnostiki pljučnih bolezni. Ustrezna in natančna predpriprava ter obdelava dobljenih vzorcev za analizo sta ključnega pomena, saj le na tak način dobimo kvalitetne citološke preparate, ki nam pomagajo pri oceni vnetja v dihalnih poteh. V magistrski nalogi smo primerjali dve metodi predpriprave in obdelave vzorcev induciranega izmečka. Prva metoda se uporablja v rutinski praksi in je standardizirana, medtem ko je druga metoda novejša in še ni uveljavljena za delo v klinični praksi. Pred uvedbo nove metode smo optimizirali štiri dejavnike, in sicer začetno maso vzorcev induciranega izmečka, temperaturne in časovne pogoje dela ter porabo glavnega reagenta. Vzorce induciranih izmečkov smo obdelali in pripravili za citološki pregled na uveljavljeni in novi način ter potem primerjali rezultate analiz, kot so viabilnost celic, celotna koncentracija celic ter deleži posameznih vrst celic v citoloških preparatih. Namen naloge je bil ugotoviti, ali novejša metoda, kljub spremembi v desetih korakih protokola, daje zanesljive in primerljive rezultate z že obstoječo metodo ter ali obstajajo določene prednosti, ki bi v prihodnosti olajšale delo na tem področju. V raziskavo smo vključili devetnajst vzorcev. Vsi so bili inducirani s pomočjo hipertonične solne raztopine. Analizirali smo sveže vzorce, ki smo jih razdelili na dva dela in vsakega pripravili za analizo po uveljavljenem in novem postopku. Rezultati so pokazali, da novejša metoda kljub statistično značilno nižji masi vzorcev induciranega izmečka daje povsem primerljive rezultate kot rutinska metoda glede celičnega profila, to je deleža različnih celic v izmečku. Za povprečno 11,5 % nižja viabilnost celic je bila prisotna v štirih izmed devetnajstih vzorcev, medtem ko je bila celotna koncentracija celic pri novi metodi statistično značilno višja. Z novejšo metodo kljub dodatnemu koraku centrifugiranja za povprečno sedem minut skrajšamo čas od sprejema vzorcev v laboratorij do priprave citoloških preparatov, kar je opazno predvsem pri povečani količini vzorcev ter pri vzorcih slabše kakovosti. Z uporabo novejše metode smo za povprečno 89 % zmanjšali porabo glavnega in najdražjega reagenta, ki je nepogrešljiv člen v obeh postopkih obdelave vzorcev induciranega izmečka, saj zmanjša prisotnost sluzi, izboljša homogenizacijo vzorca in kasneje vpliva na ustreznejšo razporeditev celic v citoloških preparatih. Z nižjo porabo glavnega reagenta občutno izboljšamo ekonomično učinkovitost metode, hkrati pa so rezultati primerljivi z rezultati obstoječega postopka. Zaključimo lahko, da je uvedba novejšega postopka priprave induciranega izmečka za citološki pregled smiselna, saj daje primerljive rezultate v krajšem času ter ob manjši porabi reagentov.

• Jezik: Slovenski jezik
• Ključne besede: Citologija, inducirani izmeček, ditiotreitol, viabilnost celic, celični profil
• Vrsta gradiva: Magistrsko delo/naloga
• Organizacija: FFA - Fakulteta za farmacijo
• Leto izida: 2022
• PID: 20.500.12556/RUL-135677
• Datum objave v RUL: 25.03.2022

Sekundarni jezik

• Jezik: Angleški jezik
• Naslov: Optimization of selected preanalytic and analytic phase factors in microscopic examination of induced sputum

Izvleček

Sputum induction is an investigative method to stimulate the natural secretion of mucus from the airways. The substance obtained in this process is called induced sputum. It originates from the lungs or lower parts of the airways. The induced sputum is often gathered by inhalation of aerosols of the hypertonic saline solution produced by an ultrasonic nebulizer. Drops of saline irritate the mucous membranes, trigger coughing and cause expectoration of sputum. Appropriate and precise pre-preparation and processing of given samples for analysis are of key importance, because only in this way do we get quality cytological compounds that help us assess the functioning of the lungs and inflammation in the airways. In the dissertation, we compared two methods of pre-preparation and processing of taken samples of induced sputum. We have been using the first method for a long time in routine practice and is hence standardized. However, the second method is newer and has not yet been established for work in clinical practice. Using the recently developed approach, we optimized four factors, the initial mass of the samples of the induced sputum - plaques, temperature and time conditions of work and the consumption of the fundamental reagent. Among the methods, we compared cell viability, total cell concentration and the proportion of individual cell types on cytological preparations. We were interested in whether the newer procedure, despite the change in the ten steps of the protocol, gives reliable and comparable results with the existing method and whether certain advantages would facilitate work in this field in the future and replace the already standardized procedure. The results showed that the newer method, despite a statistically significant lower mass of samples of induced sputum, gives completely comparable results with the routine method in terms of cell profile. Slightly lower cell viability was present in only four samples that deviated from the majority, while the overall cell concentration in the new method was statistically higher. Although the new procedure has the additional centrifugation step, we still shorten the time from the acceptance of samples in the laboratory to the production of permanent cytological preparations. That is particularly noticeable when there is a large number and samples of poorer quality. Using the new process, we also reduced the consumption of the main and most expensive reagent, which is an essential link in both methods of processing samples of induced sputum, as it reduces the presence of mucus, improves homogenization and the dispersion of cells. With its lower consumption, we significantly increase the economic efficiency of the method, and at the same time, the results are comparable to the already existing procedure.

• Ključne besede: Cytology, induced sputum, dithiothreitol, cell viability, cell profile